FastPol HF DNA Polimerase | Taq DNA Polimerase High Fidelity Cellco

FastPol HF DNA Polimerase

Ficha técnica

Código	FastPol HF DNA Polimerase
Categoria	PCR Convencional
Marca	Cellco

Descrição Geral

FastPol HF DNA Polimerase | Taq DNA Polimerase High Fidelity - Cellco
Derivada de Pyrococus furiosus, recombinante, E. coli
Similar a Phusion®

For in vitro use only!

Definição de unidade: One unit is defined as the amount of the enzyme required to catalyze the incorporation of 10 nmoles of dNTPs into an acidinsoluble form in 30 minutes at 70 °C.

Envio: Shipped on blue ice

Condições de armazenamento: Store at -20 °C

Avoid freeze/thaw cycles

Validade: 24 months

Concentração: 2 units/μL

Kit contents:

FastPol HF DNA Polymerase (blue cap)

2 units/µl FastPol DNA Polymerase in Tris-HCl, KCl, EDTA, DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH 8.0 (25°C) and stabilizers.

FastPol HF Reaction Buffer complete (red cap) - 5x conc.

Optimized buffer for FastPol Polymerase.

Descrição:

FastPol HF é uma polimerase geneticamente desenhada que combina alta termoestabilidade com máxima fidelidade e processividade em uma única enzima. Com uma taxa de erro 6x menor que a Pfu e um índice de extensão 3x maior que a Taq polimerase, a nossa FastPol HF apresenta um elevado rendimento com alta velocidade de amplificação sem comprometer a acurácia dos produtos amplificados. A combinação elevada fidelidade, processividade e rendimento com quantidade mínima de enzima faz da FastPol uma opção ideal tanto para PCRs de rotina e clonagem quanto para a amplificação de moldes difíceis de DNA com alto teor GC. FastPol vem com um sistema de tampão otimizado contendo Mg₂+ e apropriado para várias finalidades em geral.

Características:
- produzida com uma etapa adicional de purificação para eliminação de DNA bacteriano contaminante
- ausente de atividade exonuclease 5'→ 3'
- exibe atividade exonuclease 3'→ 5'
- extremidade do produto: coesiva
- tempo de extensão recomendado: 15-30 sec/kb
- PCR de longa extensão: produtos de até 25 kbp

PCR Reaction Setup:

The PCR procedure below shows appropriate volumes for a single 50-μL reaction. For multiple reactions, prepare a master mix of components common to all and then dispense appropriate volumes into each PCR reaction tube prior to adding template DNA and primers. Thaw, mix, and briefly centrifuge each component before use.

Add the following components to a microcentrifuge tube:

1. Prepare PCR master mix

Note: Consider the volumes for all components listed next steps to determine the correct amount of water required to reach your final reaction volume.

Component	50 μL rxn	Final conc.
Water, grade PCR	to 50 μl	-
5x Reaction Buffer	10 μl	1x
dNTP (Mix 10 mM)	1 μl	200 μM each
FastPol HF DNA Polymerase (2U/ µL)	0,5 μl	1 U/reaction

*Do not exceed 1U/50 µL reaction of FastPol

Mix and briefly centrifuge the components.

2. Add template DNA and primers

Component	50 μl rxn	final conc.
Forward primer (10 μM)	1,5 – 5 μl	0,3 – 1 μM
Reverse primer (10 μM)	1,5 – 5 μl	0,3 – 1 μM
Template DNA	x μl	10 pg**

* The minimum recommended primer concentration is 0,3 µM . For maximum product yield a final concentration of 1 µM is used

**Genomic DNA: 10 ng - 1 µg; plasmidial or viral DNA: 5 pg - 10 ng

Cap each tube, mix, and briefly centrifuge the content.

3. Incubate reactions in a thermal cycler

Recommended cycling conditions:

Initial denaturation	98 °C	2 min	1x
Denaturation	98 °C	20 sec	25-35 cycles
Annealing***	49 - 68 °C	15 sec	25-35 cycles
Elongation	68 °C	15 - 30 sec/kb	25-35 cycles
Final extension (optional)	68 °C	1 – 10 min	1x
Hold	4 – 8 °C	∞	1x

***The annealing temperature depends on the melting temperature of the primers used

For optimal specificity and amplification an individual optimization of the recommended parameters may be necessary for each new template DNA and/or primer pair.

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